VEGF Receptor 2具有酪氨酸激酶活性，与VEGFA、VEGFC、VEGFD结合激活后能够介导内皮细胞的增殖、侵袭和迁移，提高血管透性和新血管形成。

   成熟的VEGF Receptor 2为糖基化的跨膜蛋白，分子量为230 KDa，由胞外域（ECD）、跨膜域(TMD)、近膜域(JMD)、酪氨酸激酶域（TKD）和C端域（CTD）组成。ECD负责结合VEGF，使VEGF Receptor 2发生二聚化；TMD和JMD调控激酶活性；TKD和CTD激活信号通路。

   人源VEGF Receptor 2 包含18个N-糖基化位点，15个磷酸化位点及多个ATP结合、底物结合位点，这些位点对于蛋白的折叠、激活、转录后修饰、细胞附着和功能调节具有重要作用。

   VEGFR-2激活后可介导下游信号通路中许多蛋白的磷酸化（例如Akt、mTOR，Erk1/2、FAK和 p70S6K），促进肿瘤血管生成。

   表达广泛。

   血管内皮细胞、血管瘤组织中常见。

   内质网、细胞膜。

   人源VEGF Receptor 2异构体1（P35968-1）：细胞膜、细胞质、内体、细胞核。（）

   人源VEGF Receptor 2异构体2、3（P35968-2、3）：分泌至胞外。

   人（P35968）： 异构体1：152 KDa（预测）；异构体2-3：76-80 KDa（预测）

   小鼠（P35918）：异构体1：151 KDa（预测）；异构体2：76 KDa（预测）

   大鼠（O08775）：151 KDa（预测）

   N-糖基化，磷酸化，泛素化

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   在WB实验中，VEGF Receptor 2可能会检测到多条条带，因为在人和小鼠中，VEGF Receptor 2不仅有多个异构体，还存在翻译后修饰。

   VEGF Receptor 2是跨膜蛋白，建议提取膜蛋白来进行WB检测。

   VEGF Receptor 2容易降解，在WB实验中，建议使用新鲜的裂解液，当天完成样品制备和跑胶，避免裂解液反复冻融。

   VEGF Receptor 2的磷酸化修饰可能需要条件诱导（例如使用ab5475时，HT-29/Caco-2需要先进行血清饥饿，再添加100 ng/mL of SCF处理10min），有助于解决信号弱或者无信号现象。

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     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     添加足够量的复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     选择合适的裂解液来富集更多靶标蛋白。

     整个样本制备过程中，保持样本置于冰上。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   电泳

     至少上样20μg总蛋白进行电泳。

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议使用较低浓度的分离胶进行电泳。

   转膜

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议在转膜缓冲液中加入SDS至终浓度为0.1%。

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议使用0.45μm的PVDF膜。

     对于分子量较大的靶标蛋白，建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。

     建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功（如果选择荧光标记检测，请确保丽春红完全清洗干净）。

   封闭

     没有适用于所有体系的封闭液，请选择合适的封闭液。

Veli-Matti Leppanen, Andrea E Prota, Michael Jeltsch et al. Structural determinants of growth factor binding and specificity by VEGF receptor 2. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2010). 107(6): 2425–2430.doi: 10.1073/pnas.0914318107